OMBM: Préparation des solutions d'extraction de l' ADN plasmidique

Introduction

Les protocoles d'extraction des acides nucléiques sont nombreux et passent par plusieurs étapes qui nécessitent différentes solutions, quelles soient prêtes à l'emploi(kits commerciaux) ou préparés au laboratoire[5]. Ces solutions sont choisies en fonction de l'échantillon de départ, de l'acide nucléique ciblé et du protocole à suivre. Leur principal rôle est d'assurer une extraction facile et complète de l'acide nucléique d'intérêt, tout en le conservant de la dégradation au cours des différentes étapes.[6]

Objectifs

Ce travail pratique permet l'apprentissage des méthodes de préparation des solutions utilisées lors de l'extraction de l'ADN plasmidique au laboratoire de biologie moléculaire.

Matériel et réactifs utilisés au laboratoire

Le PH mètre

Afin de réaliser ce travail pratique requis les différents réactifs et matériel utilisés au laboratoire sont

les suivants :

Eau distillée EDTA

TrisHcl-

Naoh-

SDS

Acétate de sodium

BéchersFlacons et tubes BalanceAgitateur magnétique-pH mètre-Autoclave.

Matériels et réactifs

solutions utilisés pour l'extraction de l'ADN

les solutions tampons préparées au laboratoire

1/Préparation de la solution tampon TRIS -HCL -EDTA

-Peser les masses deTris Hcl et de l'EDTA nécessaires pour préparer 50 ml du tampon.

-Dissoudre le Tris Hcl dans 40 ml d'eau distillée.

-Ajuster le PH a 8.

-Ajouter l'EDTA et bien agiter.

-Remplir le volume a 50 ml.

-Stériliser a l'autoclave.

2/Préparation de la lyse alcaline
cette solution doit être préparée extemporanément (le jour de son utilisation)

3/Préparation de la solution de neutralisation

-Peser les masses deTris Hcl et de l'EDTA nécessaires pour préparer 50 ml du tampon.

-Dissoudre le Tris Hcl dans 40 ml d'eau distillée

-Ajuster le PH a 8.

-Ajouter l'EDTA et bien agiter.

-Remplir le volume a 50 ml.

-Stériliser a l'autoclave.

Modifié le: lundi 19 août 2024, 10:24